哪些分子生物学技术被用于对细菌的分类，鉴定 有哪些技术可被用于对细菌进行分类、鉴定？方法的研究概况。
DNA-DNA杂交，该技术被认为是细菌分类和鉴定的“黄金法则”，主要方法如下：标记法、吸光度法、荧光强度法等。
16SrRNA法：细菌核糖体的RNA有三种类型，(23S、16S、5S)rRNA，其中16S被认为作为生物系统发育和分类指标最为合适。
细菌核心基因（看家基因），包括gyrB、rpoB、groEL、recN等。
哪些分子生物学技术被用于对细菌的分类，鉴定
1、细菌常规鉴定方法
1. 1 免疫诊断技术
1. 1. 1凝集试验
目前常用的是葡萄球菌协同凝集试验(SPA - CoA) ,金黄色葡萄球菌细胞壁的A 蛋白(SPA) 能与动物血清中IgG的Fc 结合,成为致敏的颗粒载体,特异性IgG的Fc 与SPA 结合后, F (ab’) 2 段暴露在葡萄球菌表面,与相应细菌反应呈现凝集现象,此法用于细菌快速鉴定和分型。
1. 1. 2免疫酶技术
免疫酶技术( EIA , Enzymeimmunoa2ssay) 是将酶标记的抗抗体与抗原—抗体复合物结合形成抗原- 抗体- 酶标记抗抗体复合物,加入酶底物产生有色产物。以酶联免疫吸附测定( ELISA) 和斑点酶联免疫吸附技术(Dot - ELISA) 应用较广泛。
1.1. 3 免疫荧光技术
免疫荧光技术( FIA , Fuorescenceimmunoassay) 是将一抗滴加于待检抗原上,再加一抗的荧光抗体(二抗) ,呈现特异性的荧光抗原抗体复合物以鉴定病原菌。此法比ELISA 更直观,可直接观察到菌体形态。
1. 1. 4放射免疫测定技术
放射免疫测定( RIA , Rad2ioimmunoassay) 是用放射性同位素标记抗原或抗体,与相应的抗体或抗原结合后通过放射自显影定性和定量抗原或抗体。
1. 1. 5免疫胶体金标记技术
胶体金是继酶、荧光素和放射同位素后免疫标记技术中令人瞩目的新标记物。胶体金是氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、枸橼酸钠等的作用下,聚合成特定大小的金颗粒,通过静电作用与抗体或抗原形成一种稳定的胶体状态,即为免疫金,免疫金与相应的抗原抗体结合后,呈现特定的颜色反应。
1. 2 蛋白质图谱分析
蛋白质图谱分析主要采用聚丙烯酰胺凝胶电泳( PAGE,Polyacrylamide Gel Electrophoresis)和SDS -PAGE。聚丙烯酰胺凝胶是单体丙烯酰胺(Acr) 和
N ,N’- 亚甲双丙烯酰胺(Bis) 在催化剂过硫酸铵和加速剂四甲基乙二胺(TEMED)作用下聚合为含酰胺基侧链的脂肪族长链,相邻长链通过甲叉桥连接形成三维网状结构物质,PAGE 根据电荷、形状和分子大小分离和定性、定量分析蛋白质和多肽。SDS - PAGE 根据分子量的不同分离蛋白质,SDS 是一种阴离子表面活性剂,与蛋白质疏水部分结合使蛋白质带大量负电荷且使蛋白质的形状趋向一致,抵消了蛋白质本身所带电荷和形状的影响,因此,样品分子量的对数与其在凝胶中的迁移率呈直线关系。
详见 http://epub.cnki.net/kns/brief/default_result.aspx
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